蘇云金芽胞桿菌（Bt）能產(chǎn)生多種殺蟲(chóng)蛋白，高效特異的殺死多種農(nóng)業(yè)害蟲(chóng)。然而，全世界已經(jīng)有13種重要的農(nóng)業(yè)害蟲(chóng)對(duì)Bt生物殺蟲(chóng)劑或轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲(chóng)作物產(chǎn)生了抗藥性。
小菜蛾幼蟲(chóng)。受訪者供圖
近日，中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所研究員張友軍團(tuán)隊(duì)破解了最早被報(bào)道對(duì)Bt生物殺蟲(chóng)劑產(chǎn)生抗藥性的農(nóng)業(yè)害蟲(chóng)小菜蛾適應(yīng)性進(jìn)化的分子機(jī)制，首次揭示了一個(gè)中腸轉(zhuǎn)錄調(diào)控環(huán)介導(dǎo)小菜蛾Bt抗性的調(diào)控機(jī)制。
相關(guān)成果7月14日在線發(fā)表于Cell旗下國(guó)際期刊《創(chuàng)新》（The Innovation）。
適應(yīng)性進(jìn)化的“舵手”：表觀遺傳與轉(zhuǎn)錄調(diào)控
論文通訊作者張友軍告訴《中國(guó)科學(xué)報(bào)》，小菜蛾是一種為害十字花科蔬菜的世界性重大農(nóng)業(yè)害蟲(chóng)，也是世界上第一個(gè)被報(bào)道在田間對(duì)Bt生物殺蟲(chóng)劑產(chǎn)生高抗性的昆蟲(chóng)，因此成為研究昆蟲(chóng)如何對(duì)Bt生物殺蟲(chóng)劑產(chǎn)生抗藥性的良好實(shí)驗(yàn)材料。
此前的研究中，張友軍團(tuán)隊(duì)發(fā)現(xiàn)，昆蟲(chóng)蛻皮激素20E含量升高會(huì)激活小菜蛾絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號(hào)途徑，反式調(diào)控多個(gè)中腸基因差異表達(dá)，最終導(dǎo)致小菜蛾對(duì)Bt生物殺蟲(chóng)劑進(jìn)化產(chǎn)生高抗性。
“然而，Bt抗性小菜蛾蛻皮激素含量升高的調(diào)控機(jī)制尚不明確。于是我們將研究重點(diǎn)關(guān)注在與昆蟲(chóng)蛻皮激素20E含量變化密切相關(guān)的表觀遺傳和轉(zhuǎn)錄調(diào)控上。”張友軍說(shuō)。
論文第一作者兼共同通訊作者、蔬菜所研究員郭兆將告訴《中國(guó)科學(xué)報(bào)》，表觀遺傳學(xué)是指在不改變基因的DNA序列的情況下，基因功能發(fā)生了可遺傳的變化，最終導(dǎo)致表型的變化，包括非編碼RNA、DNA甲基化、組蛋白修飾和染色質(zhì)重塑等。轉(zhuǎn)錄調(diào)控是基因表達(dá)調(diào)控的一部分，它決定哪些基因在何時(shí)、何地、以何種方式被表達(dá)，主要通過(guò)轉(zhuǎn)錄因子、啟動(dòng)子區(qū)域、增強(qiáng)子和RNA聚合酶等直接調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄。
miRNA：導(dǎo)致完美抗性的“開(kāi)關(guān)”
郭兆將介紹，miRNA是真核生物中廣泛存在的一類長(zhǎng)度為18~24個(gè)核苷酸的小型非編碼RNA分子，是一種重要的表觀遺傳調(diào)控因子。miRNA通過(guò)與信使RNA （mRNA）上的互補(bǔ)序列結(jié)合，抑制轉(zhuǎn)錄后基因表達(dá)，進(jìn)而影響生物體內(nèi)的多種生物學(xué)功能。
他們首先發(fā)現(xiàn)，miR-8545的表達(dá)量在小菜蛾Bt抗性種群中顯著升高。隨后，他們證明了miR-8545的升高與小菜蛾Bt抗性相關(guān)。
“為了驗(yàn)證miR-8545是通過(guò)哪個(gè)靶基因介導(dǎo)小菜蛾Bt抗性，我們利用5個(gè)miRNA靶基因預(yù)測(cè)軟件，共獲得7個(gè)候選靶基因，其中僅有葡萄糖脫氫酶GLD基因（PxGLD）能夠與miR-8545直接結(jié)合，而且該基因在小菜蛾Bt抗性種群中表達(dá)量顯著降低?！惫讓⒄f(shuō)。
為了探索該基因的表達(dá)量降低是否與小菜蛾Bt抗性相關(guān)，他們利用干擾技將該基因在敏感種群中進(jìn)行沉默。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，小菜蛾幼蟲(chóng)對(duì)Bt殺蟲(chóng)蛋白的敏感性顯著降低。表明小菜蛾中該基因的表達(dá)量降低與Bt抗性相關(guān)。
接下來(lái)，他們發(fā)現(xiàn)，將該基因在敏感種群中進(jìn)行沉默后，蛻皮激素20E的含量顯著增加。同時(shí)，利用顯微注射將蛻皮激素20E注射到小菜蛾幼蟲(chóng)體內(nèi)后，PxGLD基因的表達(dá)量顯著增加。遺傳連鎖實(shí)驗(yàn)也表明，PxGLD基因表達(dá)量降低與小菜蛾Bt抗性表型緊密連鎖。
解釋抗性“開(kāi)關(guān)”的調(diào)控機(jī)制
論文共同第一作者、蔬菜所博士后朱流紅介紹，他們通過(guò)克隆miR-8545的啟動(dòng)子序列并進(jìn)行候選轉(zhuǎn)錄因子預(yù)測(cè)。
他們通過(guò)一系列實(shí)驗(yàn)確定，轉(zhuǎn)錄因子PxDfd能夠與miR-8545的啟動(dòng)子結(jié)合。將PxDfd基因在對(duì)bt殺蟲(chóng)蛋白敏感的小菜蛾種群中進(jìn)行沉默后發(fā)現(xiàn)，小菜蛾幼蟲(chóng)對(duì)Bt殺蟲(chóng)蛋白的敏感性顯著降低，這表明PxDfd基因的表達(dá)量降低與小菜蛾抗性相關(guān)。
朱流紅介紹，進(jìn)一步研究證明，將蛻皮激素20E注射到小菜蛾幼蟲(chóng)體內(nèi)后，PxDfd和PxGLD的表達(dá)量均顯著增加，miR-8545的轉(zhuǎn)錄水平則顯著降低。結(jié)果表明，過(guò)量的20E可以通過(guò)負(fù)反饋機(jī)制抑制PxDfd/miR-8545/PxGLD調(diào)控軸。
該研究在國(guó)際上首次明確了中腸轉(zhuǎn)錄調(diào)控環(huán)介導(dǎo)小菜蛾Bt抗性的分子機(jī)制：即PxDfd表達(dá)水平的降低導(dǎo)致miR-8545表達(dá)量增加，從而抑制PxGLD基因的表達(dá)，進(jìn)而引起B(yǎng)t抗性小菜蛾體內(nèi)20E含量顯著升高。
郭兆將說(shuō)，為了避免蛻皮激素20E的過(guò)度升高影響小菜蛾正常生長(zhǎng)發(fā)育，蛻皮激素20E含量升高后會(huì)通過(guò)負(fù)反饋調(diào)節(jié)機(jī)制抑制PxDfd基因的表達(dá)，確保小菜蛾中腸細(xì)胞中蛻皮激素20E含量的內(nèi)穩(wěn)態(tài)，從而組成了一個(gè)關(guān)鍵“調(diào)控護(hù)盾”，使小菜蛾在維持正常生長(zhǎng)發(fā)育的前提下進(jìn)化產(chǎn)生完美的Bt抗性表型。
張友軍說(shuō)，該結(jié)果為昆蟲(chóng)Bt抗性分子機(jī)制研究提供了全新的視角，對(duì)于田間害蟲(chóng)Bt抗性監(jiān)測(cè)預(yù)警和綜合治理具有重要的理論和實(shí)踐意義。
相關(guān)論文信息：https://doi.org/10.1016/j.xinn.2024.100675
